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| 食品中山梨酸、苯甲酸的測定方法 |
| 發(fā)布時間：2015-05-04 |
摘要：山梨酸是國際糧農(nóng)組織和衛(wèi)生組織推薦的高效安全的防腐保鮮劑，廣泛應(yīng)用于食品、飲料、煙草、農(nóng)藥、化妝品等行業(yè)，作為不飽和酸，也可用于樹脂、香料和橡膠工業(yè)。
1 主題內(nèi)容與適用范圍
本標準規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測定方法。
本標準適用于醬油、水果汁、果醬等食品中山梨酸、苯甲酸含量的測定。
最低檢出濃度：氣相色譜法最低檢出量為1μg，用于色譜分析的樣品為1g時，最低檢出濃度為1mg/kg。
第一篇 氣相色譜法第一法
2 原理
樣品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，與標準系列比較定量。
3 試劑
3.1 乙醚：不含過氧化物。
3.2 石油醚：沸程30～60℃。
3.3 鹽酸。
3.4 無水硫酸鈉。
3.5 鹽酸1＋1：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。
3.6 氯化鈉酸性溶液40g/L：于氯化鈉溶液40g/L中加少量鹽酸1＋1酸化。
3.7 山梨酸、苯甲酸標準溶液：準確稱取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚—乙醚3＋1混合溶劑溶解后并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于2.0mg山梨酸或苯甲酸。
3.8 山梨酸、苯甲酸標準使用液：吸取適量的山梨酸、苯甲酸標準溶液，以石油醚－乙醚3＋1混合溶劑稀釋至每毫升相當于50，100，150，200，250mg山梨酸或苯甲酸。
4 儀器
氣相色譜儀：具有氫火焰離子化檢測器。
5 分析步驟
5.1 樣品提取
稱 取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸1＋1酸化，用15，10mL乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層乙醚提 取液吸入另一個25mL帶塞量筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液40g/L洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入 25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。準確吸取5mL乙醚提取液于5mL帶塞刻度試管中，置40℃水浴上揮干，加入2mL石油醚－乙醚3＋1混合溶劑溶 解殘渣，備用。
5.2 色譜參考條件
5.2.1 色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長2m，內(nèi)裝涂以5%m/mDEGS＋1%m/mH3PO4固定液的60～80目Chromosorb W AW。
5.2.2 氣流速度：載氣為氮氣，50mL/min氮氣和空氣、氫氣之比按各儀器型號不同選擇各自的最佳比例條件。
5.2.3 溫度：進樣口230℃；檢測器230℃；柱溫170℃。
5.3 測定
進樣2μL標準系列中各濃度標準使用液于氣相色譜儀中，可測得不同濃度山梨酸、苯甲酸的峰高，以濃度為橫坐標，相應(yīng)的峰高值為縱坐標，繪制標準曲線。
同時進樣2μL樣品溶液。測得峰高與標準曲線比較定量。
5.4 計算式中：X1——樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg；
m1——測定用樣品液中山梨酸或苯甲酸的質(zhì)量，μg；
V1——加入石油醚－乙醚3＋1混合溶劑的體積，mL；
V2——測定時進樣的體積，μL；
m2——樣品的質(zhì)量，g；
5——測定時吸取乙醚提取液的體積，mL；
25——樣品乙醚提取液的總體積，mL。
由測得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。
結(jié)果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。
5.5 允許差
相對相差≤10%。
5.6 其他
在色譜圖中山梨酸保留時間為2分53秒；苯甲酸保留時間為6分8秒。
（圖略）
第二篇 高效液相色譜法第二法
6 原理
樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào)pH至近中性，過濾后進高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時間和峰面積進行定性和定量。
7 試劑
方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純試劑，水為蒸餾水或同等純度水，溶液為水溶液。
7.1 甲醇：經(jīng)濾膜0.5μm過濾。
7.2 稀氨水1＋1：氨水加水等體積混合。
7.3 乙酸銨溶液0.02mol/L：稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)濾膜0.45μm過濾。
7.4 碳酸氫鈉溶液20g/L：稱取2g碳酸氫鈉優(yōu)級純，加水至100mL，振搖溶解。
7.5 苯甲酸標準儲備溶液：準確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液20g/L5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量為1mg/mL，作為儲備溶液。
7.6 山梨酸標準儲備溶液：準確稱取0.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液20g/L5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量為1mg/mL，作為儲備溶液。
7.7 苯甲酸、山梨酸標準混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸標準儲備溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各 0.1mg/mL。經(jīng)濾膜0.45μm過濾同時測定糖精鈉時可加GB/T 5009.28中3.4糖精鈉標準儲備溶液。
8 儀器
高效液相色譜儀帶紫外檢測器。
9 分析步驟
9.1 樣品處理
9.1.1 汽水：稱取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水1＋1調(diào)pH約7。加水定容至10～20mL，經(jīng)濾膜0.45μm過濾。
9.1.2 果汁類：稱取5.00～10.0g樣品，用氨水1＋1調(diào)pH約7，加水定容至適當體積，離心沉淀，上清液經(jīng)濾膜0.45μm過濾。
9.1.3 配制酒類：稱取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水1＋1調(diào)pH約7，加水定容至適當體積，經(jīng)濾膜0.45μm過濾。
9.2 高效液相色譜參考條件
9.2.1 色譜柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不銹鋼柱。
9.2.2 流動相：甲醇：乙酸銨溶液0.02m0l/L5：95。
9.2.3 流速：1mL/min。
9.2.4 進樣量：10μL。
9.2.5 檢測器：紫外檢測器，波長230μm，靈敏度0.2AUFS。
根據(jù)保留時間定性，外標峰面積法定量。
9.3 計算式中：X2——樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg；
m3——進樣體積中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg；
V4——進樣體積，mL；
V3——樣品稀釋液總體積，mL；
m4——樣品質(zhì)量，g。
結(jié)果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數(shù)。
9.4 允許差：相對相差≤10%。
9.5 其他
同GB/T 5009.28的5.6。
注：本方法可同時測定糖精鈉。
第三篇 薄層色譜法第三法
10 原理
樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。將樣品提取液濃縮，點于聚酰胺薄層板上，展開。顯色后，根據(jù)薄層板上苯甲酸、山梨酸的比移值，與標準比較定性，并可進行概略定量。
11 試劑
11.1 異丙醇。
11.2 正丁醇。
11.3 石油醚：沸程為30～60℃。
11.4 乙醚：不含過氧化物。
11.5 氨水。
11.6 無水乙醇。
11.7 聚酰胺粉：200目。
11.8 鹽酸1＋1：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。
11.9 氯化鈉酸性溶液40g/L：于氯化鈉溶液40g/L中加少量鹽酸1＋1酸化。
11.10 展開劑。
11.10.1 正丁醇＋氨水＋無水乙醇7＋1＋2。
11.10.2 異丙醇＋氨水＋無水乙醇7＋1＋2。
11.11 山梨酸標準溶液：準確稱取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當于2.0mg山梨酸。
11.12 苯甲酸標準溶液：準確稱取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當于2.0mg苯甲酸。
11.13 顯色劑：溴甲酚紫－乙醇50%溶液0.4g/L，用氫氧化鈉溶液4g/L調(diào)至pH＝8。
12 儀器
12.1 吹風機。
12.2 層析缸。
12.3 玻璃板：10cm×18cm。
12.4 微量注射器：10μL，100μL。
12.5 噴霧器。
13 操作方法
13.1 樣品提取
稱 取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸1＋1酸化，用15，10mL乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層醚提取 液吸入另一個25mL帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液40g/L洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入 25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。吸取10.0mL乙醚提取液分兩次置于10mL帶塞離心管中，在約40℃的水浴上揮干，加入0.10mL乙醇溶解 殘渣，備用。
13.2 測定
13.2.1 聚酰胺粉板的制備：稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7mL水，研磨3～5min，立即倒入涂布器內(nèi)制成10cm×18cm、厚度0.3mm的薄層板兩塊，室溫干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。
13.2.2 點樣：在薄層板下端2cm的基線上，用微量注射器點1μL、2μL樣品液，同時各點1μL、2μL山梨酸、苯甲酸標準溶液。
13.2.3 展開與顯色：將點樣后的薄層板放入預(yù)先盛有展開劑11.10.1或11.10.2的展開槽內(nèi)，展開槽周圍貼有濾紙，待溶劑前沿上展至10cm，取出揮干， 噴顯色劑，斑點成黃色，背景為藍色。樣品中所含山梨酸、苯甲酸的量與標準斑點比較定量山梨酸、苯甲酸的比移值依次為0.82，0.73。
13.3 計算式中：X3——樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg；
m5——測定用樣品液中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，mg；
V5——加入乙醇的體積，mL；
V6——測定時點樣的體積，mL；
m6——樣品質(zhì)量，g；
10——測定時吸取乙醚提取液的體積，mL；
25——樣品乙醚提取液總體積，mL。
注：本方法還可以同時測定果醬、果汁中的糖精。
第四篇 禁用防腐劑定性試驗第四法
14 硼酸、硼砂
14.1 試劑
14.1.1 鹽酸1＋1：量取鹽酸100mL，加水稀釋至200mL。
14.1.2 碳酸鈉溶液40g/L。
14.1.3 氫氧化鈉溶液4g/L：稱取2g氫氧化鈉，溶于水并稀釋至500mL。
14.1.4 姜黃試紙：稱取20g姜黃粉末，用冷水浸漬4次，每次各100mL，除去水溶性物質(zhì)后，殘渣在100℃干燥，加100mL乙醇，浸漬數(shù)日，過濾。取1cm×8cm濾紙條，浸入溶液中，取出，于空氣中干燥，貯于玻璃瓶中。
14.2 分析步驟
14.2.1 樣品處理
稱取3～5g固體樣品，加碳酸鈉溶液40g/L充分濕潤后，于小火上烘干、炭化后再置高溫爐中灰化。量取10～20mL液體樣品，加碳酸鈉溶液40g/L至呈堿性后，置水浴上蒸干、炭化后再置高溫爐中灰化。
14.2.2 定性試驗
14.2.2.1 姜黃試紙法：取一部分灰分，滴加少量水與鹽酸1＋1至微酸性，邊滴邊攪拌，使殘渣溶解，微溫后過濾。將姜黃試紙浸入濾液中，取出試紙置表面皿上，于 60～70℃干燥，如有硼酸、硼砂存在時，試紙顯紅色或橙紅色，在其變色部分熏以氨即轉(zhuǎn)為綠黑色。
14.2.2.2 焰色反應(yīng)
取灰分置于坩堝中，加硫酸數(shù)滴及乙醇數(shù)滴，直接點火，硼酸或硼砂存在時，火焰呈綠色。
15 水楊酸
15.1 試劑
15.1.1 三氯化鐵溶液10g/L。
15.1.2 亞硝酸鉀溶液100g/L。
15.1.3 乙酸50%。
15.1.4 硫酸銅溶液100g/L。稱取10g硫酸銅CuSO4?H2O，加水溶解至100mL。
15.2 分析步驟
15.2.1 樣品提取
按GB/T 5009.28中9.1操作，將乙醚提取液蒸干后，殘渣備用。
15.2.2 定性試驗
15.2.2.1 三氯化鐵法：殘渣加1～2滴三氯化鐵溶液10g/L，水楊酸存在時顯紫堇色。
15.2.2.2 確證試驗：溶解殘渣于少量熱水中，冷后加4～5滴亞硝酸鉀溶液100g/L，4～5滴乙酸50%及1滴硫酸銅溶液100g/L，混勻，煮沸0.5h，放置片刻，水楊酸存在時呈血紅色苯甲酸不顯色。
(來源：中國化工儀器網(wǎng)) |
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